期刊简介
本刊由中华人民共和国卫生部主管，复旦大学神经病学研究所主办，本刊主要介绍国内外有关中枢、周围神经和骨骼疾病的基础研究，应用基础研究成果，并指导实践和临床发展。
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首页>中国临床神经科学杂志
- 杂志名称：中国临床神经科学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：复旦大学附属华山医院,复旦大学神经病学研究所
- 国际刊号：1008-0678
- 国内刊号：31-1752/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国学术期刊(光盘版)全文收录期刊期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中)
过表达SOD1G41S和G41D的重组腺相关病毒载体构建及其在体外N2a细胞中的作用研究
史明超；赵慧慧；牛琦；金庆文
关键词：家族性肌萎缩侧索硬化, 超氧化物歧化酶1, 重组腺相关病毒, 全细胞膜片钳技术, 电压门控性钠通道, 剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸特异性蛋白水解酶
摘要：目的 研究家族性肌萎缩侧索硬化(fALS)超氧化物歧化酶1(SOD1)上G41S和G41D两种突变型所致神经元电压门控性钠通道(Nav)电生理特性的差异及其可能的分子机制.方法 构建过表达SOD1野生型(WT)、SOD1G41S及SOD1G41D重组腺相关病毒(rAAV)载体后,体外感染小鼠神经瘤母细胞(N2a),并分为3个实验组:SOD1WT组、SOD1G41S和SOD1G41D组,并以无目的基因rAAV感染的N2a细胞为阴性对照组.利用全细胞膜片钳技术分别记录4组细胞Nav电流,绘制通道快速激活和稳态失活曲线后分析相关参数.比较各组细胞凋亡分子cleaved caspase-3在感染后24、48和72 h不同时间点的表达情况.结果 与对照组和SOD1WT组比较,感染过表达SOD1G41S组、SOD1G41D组rAAV的细胞峰值电流显著增加(P＜0.05),且SOD1G41S组显著高于SOD1G41D组(P＜0.01).SOD1G41S组和SOD1G41D组细胞半数激活电压和半数失活电压显著高于对照组和SOD1WT组(P＜0.05);但SOD1G41S组半数激活电压高于SOD1G41D组(P＜0.05);SOD1G41S与SOD1G41D组半数失活电压比较差异无显著性(P＞0.05);各组激活、失活曲线斜率差异无显著性(P＞0.05).虽然24和48h,SOD1WT、SOD1G41S、SOD1G41D组cleaved caspase-3表达量差异无显著性;但转染72 h后,SOD1G41S组和SOD1G41D组cleaved caspase-3表达量高于SOD1WT组,且SOD1G41S组高于SOD1G41D组.结论 SOD1G41S和SOD1G41D突变通过加快Nav快速激活和抑制失活过程提高神经元活性,SOD1G41S突变Nav活性显著高于SOD1G41D.SOD1G41S突变导致cleaved caspase-3表达水平高于SOD1G41D突变.
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