期刊简介
本刊由中华人民共和国卫生部主管，复旦大学神经病学研究所主办，本刊主要介绍国内外有关中枢、周围神经和骨骼疾病的基础研究，应用基础研究成果，并指导实践和临床发展。
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首页>中国临床神经科学杂志
- 杂志名称：中国临床神经科学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：复旦大学附属华山医院,复旦大学神经病学研究所
- 国际刊号：1008-0678
- 国内刊号：31-1752/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国学术期刊(光盘版)全文收录期刊期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中)
Beclin 1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对N2a细胞增殖的影响
谌雯琦；孙寅轶；刘康永；孙晓江
关键词：Beclin 1, 自噬, 基因, 短发夹RNA, 脑缺血
摘要：目的构建抑制自噬基因Beclin1 shRNA慢病毒载体，建立Beclin1基因稳定干扰的N2a细胞株，探讨抑制Beclin1对N2a细胞增殖的影响。方法根据小鼠Beclin1基因mRNA序列，设计4个Beclin 1靶点并构建shRNA慢病毒质粒。构建好的Beclin1 shRNA质粒与包装质粒psPAX2及包膜质粒pMD2.G共转染293FT细胞后得到病毒颗粒，将产生的病毒颗粒感染N2a细胞。通过荧光定量PCR和Western blot检测感染的N2a细胞中自噬基因Beclin1 mRNA及蛋白表达水平，比较shRNA的干扰效率。利用CCK8法检测干扰Beclin 1表达对N2a细胞增殖的影响。结果成功构建了表达Beclin 1 shRNA的慢病毒载体。在稳定感染Beclin 1 shRNA慢病毒载体的N2a细胞中，Beclin 1表达显著降低。抑制Beclin 1表达有促进N2a细胞增殖的趋势，但差异无统计学意义。结论成功构建了自噬基因Beclin 1 shRNA慢病毒表达载体，可显著抑制N2a细胞中Beclin 1表达。抑制Beclin 1表达有可能促进N2a细胞的增殖。
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